Herpes

La estructura de la timidina quinasa del virus del herpes simple tipo 1 (TK(HSV1)) se conoce en alta resolución en complejo con una serie de ligandos y exhibe importantes similitudes estructurales con la familia de quinasas de monofosfato de nucleósido (NMP), que se sabe que muestran grandes cambios conformacionales. cambia al unirse a los sustratos. Se describe el efecto de la unión del sustrato sobre la conformación y la estabilidad estructural de TK(HSV1), medido mediante experimentos de desnaturalización térmica, dicroísmo circular (CD) de ultravioleta lejano y fluorescencia, y los resultados indican que la conformación de la TK libre de ligando( HSV1) es menos ordenado y menos estable en comparación con la enzima ligada. Además, se presentan dos estructuras cristalinas de TK(HSV1) en complejo con dos nuevos ligandos, HPT y HMTT, refinados a 2,2 A. Aunque TK (HSV1): HPT no presenta desviaciones significativas del modelo de TK(HSV1):dT, el complejo TK(HSV1):HMTT muestra un sitio activo modificado conformacionalmente único que da como resultado una menor estabilidad térmica de este complejo. Además, mostramos que la afinidad de unión y el modo de unión del ligando se correlacionan con la estabilidad térmica del complejo. Usamos esta correlación para proponer un método para estimar las constantes de unión para los nuevos sustratos TK (HSV1) utilizando mediciones de desnaturalización térmica monitoreadas por espectroscopia de CD. Los resultados cinéticos y estructurales de ambos sustratos de prueba HPT y HMTT muestran que el sistema de desnaturalización térmica de CD es muy sensible a los cambios conformacionales causados ​​por la unión inusual de un análogo de sustrato. El complejo HMTT muestra un sitio activo modificado conformacionalmente único que da como resultado una menor estabilidad térmica de este complejo. Además, mostramos que la afinidad de unión y el modo de unión del ligando se correlacionan con la estabilidad térmica del complejo. Usamos esta correlación para proponer un método para estimar las constantes de unión para los nuevos sustratos TK (HSV1) utilizando mediciones de desnaturalización térmica monitoreadas por espectroscopia de CD. Los resultados cinéticos y estructurales de ambos sustratos de prueba HPT y HMTT muestran que el sistema de desnaturalización térmica de CD es muy sensible a los cambios conformacionales causados ​​por la unión inusual de un análogo de sustrato. El complejo HMTT muestra un sitio activo modificado conformacionalmente único que da como resultado una menor estabilidad térmica de este complejo. Además, mostramos que la afinidad de unión y el modo de unión del ligando se correlacionan con la estabilidad térmica del complejo. Usamos esta correlación para proponer un método para estimar las constantes de unión para los nuevos sustratos TK (HSV1) utilizando mediciones de desnaturalización térmica monitoreadas por espectroscopia de CD. Los resultados cinéticos y estructurales de ambos sustratos de prueba HPT y HMTT muestran que el sistema de desnaturalización térmica de CD es muy sensible a los cambios conformacionales causados ​​por la unión inusual de un análogo de sustrato. Usamos esta correlación para proponer un método para estimar las constantes de unión para los nuevos sustratos TK (HSV1) utilizando mediciones de desnaturalización térmica monitoreadas por espectroscopia de CD. Los resultados cinéticos y estructurales de ambos sustratos de prueba HPT y HMTT muestran que el sistema de desnaturalización térmica de CD es muy sensible a los cambios conformacionales causados ​​por la unión inusual de un análogo de sustrato. Usamos esta correlación para proponer un método para estimar las constantes de unión para los nuevos sustratos TK (HSV1) utilizando mediciones de desnaturalización térmica monitoreadas por espectroscopia de CD. Los resultados cinéticos y estructurales de ambos sustratos de prueba HPT y HMTT muestran que el sistema de desnaturalización térmica de CD es muy sensible a los cambios conformacionales causados ​​por la unión inusual de un análogo de sustrato